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高效液相色谱法检测蜜饯中甜蜜素实验方法

信息来源:m-i.cn   时间: 2012-12-07  浏览次数:515

    一、实验目的
    1.检测蜜饯中的甜蜜素含量
    2.验证并重现文献中关于甜蜜素检测的方法,并有针对性的作出改进。
    二、实验原理
    在酸性的介质中,甜蜜素经次氯酸钠溶液衍生,正己烷反相萃取衍生物N,N-二氯环己胺,在314nm波长下有最大吸收。
    三、实验材料、试剂耗材及仪器设备
    1.实验材料
    某品牌珍珠梅
    2.试剂耗材
    2.1甜蜜素标准品乙腈(国药色谱纯);超纯水(自制);硫酸(优级纯);次氯酸钠(有效氯含量超过5%);正己烷(色谱纯);针式过滤器(有机系和无机系)
    2.2工作液
    2.2.1甜蜜素母液:精确称取1.0000g甜蜜素标准品,置于100ml容量瓶中加水定容,配制成10.00mg/ml的母液
    2.2.2硫酸溶液(1:1):取10ml超纯水于50ml烧杯中,另量取10ml浓硫酸小心加入到水中,边加边搅拌,待温度降至室温后使用。
    2.2.3甜蜜素工作液:取甜蜜素母液,分别用水稀释成0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00mg/ml的标准工作溶液。
    3.仪器设备
    安徽皖仪LC3100梯度系统高效液相色谱仪(可变波长紫外检测器);超纯水机(安徽皖仪);高速离心机;超声波清洗器;漩涡混合器
    四、实验方法及步骤
    1.实验方法
    1.1制作系列梯度的甜蜜素标准工作曲线
    1.2样品衍生化,检测浓度
    1.3利用高效液相色谱法检测甜蜜素含量
    色谱条件如下:
    色谱柱:C18(2),4.6*250mm,5um
    流动相:乙腈:水=80:20流速:1ml/min
    进样量:20ul柱温:40摄氏度
    波长:314nm
    2.实验步骤:
    2.1标准工作曲线建立
    2.1.2分别精确吸取10ml甜蜜素标准工作液至50ml的带盖的玻璃瓶中
    2.1.3分别加入2ml硫酸溶液(1:1),5ml正己烷,1ml次氯酸钠溶液,旋紧盖子漩涡震荡1分钟
    2.1.4吸取上层的有机相转移到另一只玻璃瓶中,加入30ml超纯水,漩涡震荡1分钟
    2.1.5重复一次水洗过程,吸取上层有机相,0.45um滤膜过滤后进样检测
    2.1.6根据检测数据,以样品浓度为横坐标,检测器的响应值为纵坐标建立标准工作曲线
    2.2样品测定
    2.2.1取10g的样品的果肉,用剪刀将其剪碎,置于100ml的烧杯中,加入50ml超纯水,浸泡2小时,在此期间每隔30分钟用玻璃棒搅拌一次。
    2.2.2取上清液高速离心或用0.45um的滤膜过滤
    2.2.3移取10ml离心或过滤后的溶液按照上述标准品的衍生方法处理,如果样品中的甜蜜素含量过高可稀释至合适的浓度,本实验根据实际情况将上清液稀释10倍,
    2.2.4吸取衍生处理后的有机相层过滤,取20ul注入液相色谱仪检测
    2.2.5根据实验数据采用外标法定量。
    五、实验数据
    1.甜蜜素标准品谱图相关信息
    1.1标准品谱图
    1.2甜蜜素系列浓度标准品叠加图
    1.3标准工作曲线
    2.样品谱图信息
    序号文件名峰面积保留时间峰高半高峰宽浓度
    1样2(稀释10倍)12327267.3341685212.96755.73546
    2样2(稀释10倍)22249187.3591681712.55853.79997
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